作者：仝志琴 單位：洛陽市疾病預防控制中心

隨著我國人民生活水平的提高，對食品衛生的要求也越來越高。食品微生物檢驗是食品衛生監督的重要組成部分。傳統的國標檢驗方法要經過增菌、分離培養、生化實驗、血清學實驗等，過程繁瑣，需要耗費大量的人力物力。近年來，國內外學者在傳統檢驗方法的基礎上，研究和探索出了許多快速的儀器檢驗方法。本文應用VIDAS和VITEK32儀器對食品中致病菌進行檢測，并與傳統方法進行比較，以探索快速檢驗方法在食品檢驗中的應用。

1材料與方法

1．1樣品來源樣品為本單位公共衛生研究所無菌采集的全市超市、集貿市場、飯店及個體商店肉與肉制品，糧食加工品及米面制品、豆制品，動物性水產品，生食類蔬菜，嬰兒配方食品，冷凍食品，餐飲食品，共257份，無菌包裝，每件樣品至少250g，及時送實驗室進行增菌培養。

1．2檢驗項目沙門氏菌、單增李斯特菌。

1．3主要材料與儀器干燥培養基購自北京陸橋技術有限公司;致病菌顯色平板由鄭州貝瑞特公司提供;診斷血清由寧波天潤生物藥業有限公司生產;全自動熒光免疫分析儀(miniVIDAS)及試紙條由法國生物梅里埃公司生產;全自動微生物生化鑒定儀(VITEK32)及鑒定卡由法國生物梅里埃公司生產。

1．4檢驗方法國標法:按照國家標準GB4789－2010檢驗方法進行檢驗。VIDAS+VITEK32法:按照miniVIDAS操作手冊，樣品經過前增菌和后增菌，以無菌操作取1mL后增菌肉湯，在100℃水浴中加熱15min，取出0．5mL煮沸滅活的肉湯加入VIDAS試劑條的樣品孔中，根據VIDAS操作規程檢驗，得出結果。對于VIDAS檢驗結果陽性者，挑取后增菌液轉種相應的致病菌顯色平板經36℃、24h培養，再挑取可疑菌落轉種營養瓊脂36℃、24h純化后，挑取菌落作革蘭氏染色鏡檢及氧化酶或觸酶、血漿凝固酶試驗。根據細菌種類選卡片，作外部試驗標記，然后按要求配置一定濁度的菌懸液填充鑒定卡，封口后，放入孵育箱孵育后自動判讀。

2結果

2．1VIDAS法與國標法檢測結果比較①VIDAS法與國標法檢測沙門氏菌結果比較:共檢測樣品257份，VIDAS法檢測沙門氏菌陽性樣品11份，國標法檢測沙門氏菌陽性樣品8份，這8份VIDAS法都檢出陽性。由此計算出檢測沙門氏菌VIDAS的靈敏度=8/8×100%=100%，特異度=246/249×100%=98．80，表1。②VIDAS法與國標法檢測單增李斯特菌結果比較:共檢測樣品257份，VIDAS法檢測單增李斯特菌陽性樣品17份，國標法檢測單增李斯特菌陽性樣品10份，這10份VIDAS法都檢出陽性。由此計算出檢測單增李斯特菌VIDAS的靈敏度=10/10×100%=100%，特異度=240/247×100%=97．17%，表2。

2．2VIDAS+VITEK32法與國標法檢測沙門氏菌結果比較①VIDAS+VITEK32法與國標法檢測沙門氏菌結果比較:共檢測樣品257份，國標法檢測沙門氏菌陽性樣品8份，檢出率3．11%，VIDAS+VITEK32法檢測沙門氏菌陽性樣品9份檢出率3．50%。為了驗證VIDAS+VITEK法的可靠性，將VIDAS+VITEK法做出的陽性菌種再用國標方法進行生化鑒定，結果完全一致。②VIDAS+VITEK32法與國標法檢測單增李斯特菌結果比較:共檢測樣品257份，國標法檢測單增李斯特菌陽性樣品10份，檢出率3．89%，VIDAS+VITEK32法檢測單增李斯特菌陽性樣品12份，檢出率4．67%。將VIDAS+VITEK法做出的陽性菌種再用國標方法進行生化鑒定，結果完全符合。

3討論

VIDAS是聯免疫吸附方法的全自動熒光免疫分析系統。它采用一系列增菌培養基和大量可供選擇的選擇性培養基，促進目標致病菌的生長，使其達到檢測方法對檢測限的要求。另外，針對不同致病菌，VIDAS采用不同抗體，抗體捕獲樣品目標致病菌的特異性抗原，捕獲后進行洗滌，使抗原抗體復合物與液體中的其他物質分離，然后加入堿性磷酸酶標記的抗體，它只結合目標致病菌的特異性抗原，此時酶量與目標致病菌的量呈一特定比例。由于堿性磷酸酶可分解試劑條中的熒光底物，發出熒光，因此系統可通過檢測熒光強度，判斷致病菌的含量［1］。VIDAS檢測能力強、速度快，一般上機后幾十分鐘可以得到初篩結果。從本研究可以看出，VIDAS法的靈敏度為100%，所以可以作為大批量樣品的篩查，能有效地節約檢驗時間和工作量。

VITEK32對細菌的鑒定是以每種細菌的微量生化反應為基礎。VITEK測試卡含有多種生化反應孔，內含不同反應所需要的底物。將手工分離的待檢純菌落制成符合規定濁度要求的菌懸液，經充填機將菌懸液注入測試卡內，封口后放入讀數器中，由讀數器按光學掃描原理，定時測定各生化介質中指示劑的顯色并在電腦上自動打印［2］。VITEK32鑒定過程程序化、規范化，簡便快捷。本研究表明，VITEK32鑒定結果準確，經國標法驗證，結果完全一致，這與黃雪珍等人的研究結果一致［3］。而由于VIDAS存在一定的假陽性結果，需要進行進一步的鑒定，正好可以利用VITEK32鑒定快捷、準確的特點進行最終的鑒定［4］。國標檢驗方法在篩選可疑菌落的過程中，受許多人為因素的影響，比如平板劃線技術、對可疑菌落的判定經驗等，在篩查中難免遺漏。而VIDAS采用儀器化程序操作，去掉了人為因素，再經過VITEK32進一步的鑒定，檢出率有可能高于國標法，從而提高了工作效率和結果的準確性［5］。