方法

分組及給藥：取健康大鼠60只，隨機(jī)均勻分成空白組、模型組、田七跌打風(fēng)濕膏組、白酒組、大、小劑量半夏酒糊組，每組10只。實(shí)驗(yàn)前1d將大鼠右后肢脫毛，并測(cè)量其周長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)當(dāng)天除空白組外，其余各組將大鼠固定，用1根直徑為3cm、高25cm的空心管置于大白鼠右后肢軟組織上，把1根重約1000g鈍頭鐵杵，自空心管頂端自由落體擊中大鼠右后肢軟組織，造成明顯皮下出血及腫脹的非開放性軟組織損傷模型。造模成功后測(cè)量各組大鼠右后肢周長(zhǎng)并進(jìn)行癥狀積分，然后在損傷部位給予相應(yīng)藥物。田七跌打風(fēng)濕膏組敷田七跌打風(fēng)濕膏，厚度2mm，約0.25g/cm2；大、小劑量半夏酒糊組分別以藥棉吸附濃度0.25g/mL、0.15g/mL糊劑后濕敷，用量約0.5mL/cm2；白酒組給予0.25g/mL白酒淀粉糊，用量約0.5mL/cm2；空白組、模型組以藥棉蘸0.9%氯化鈉溶液濕敷，用量約0.5mL/cm2，給藥后均以保鮮膜覆蓋膠布固定，每天保持藥物接觸皮膚6h，6h后以0.9%氯化鈉溶液洗凈藥物，每日1次，共5d。觀測(cè)指標(biāo)：每天觀察并記錄第1、3、5天傷肢癥狀積分和周長(zhǎng)變化（周長(zhǎng)變化=用藥后周長(zhǎng)-用藥前周長(zhǎng)，小于0按0記）。大鼠外傷血瘀癥狀積分評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)：①皮下瘀血：多量塊狀計(jì)2分；少量點(diǎn)狀計(jì)1分；無(wú)瘀血者計(jì)0分。②肌肉腫脹：明顯腫脹計(jì)2分；稍有腫脹計(jì)1分；無(wú)腫脹者計(jì)0分。③肌肉顏色：紫暗色深計(jì)2分；暗紅色淺計(jì)1分；色澤正常計(jì)0分。在給藥后第6天早上眼眶取血，檢測(cè)血液流變學(xué)指標(biāo)，取大鼠傷肢軟組織固定于10%甲醛溶液中，常規(guī)病理切片，進(jìn)行病理觀察。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：數(shù)據(jù)分析用SPSS13.0forWindows統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)資料的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料用x-±s表示，等級(jí)資料采用Ridit檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

對(duì)大鼠外傷血瘀模型損傷部位的肉眼觀察從表1可以看出，與空白組比較，模型組大鼠右后肢損傷癥狀積分均顯著升高（P<0.01），說(shuō)明造模成功；造模第1天，與模型組比較，各組大鼠右后肢損傷癥狀積分均無(wú)顯著性差異，說(shuō)明分組均勻；自造模第3天起，與模型組比較，大劑量半夏酒糊組、田七跌打風(fēng)濕膏組、小劑量半夏酒糊組均可顯著降低大鼠右后肢損傷癥狀積分（P<0.01，P<0.05）。白酒組大鼠右后肢損傷癥狀積分沒有明顯的影響。

對(duì)大鼠外傷血瘀模型右后肢周長(zhǎng)的影響從表2可以看出，與空白組比較，模型組大鼠造模后右后肢周長(zhǎng)變化均顯著性升高（P<0.01），說(shuō)明造模成功。第1天與模型組比較用藥各組右后肢周長(zhǎng)變化無(wú)顯著性差異，說(shuō)明分組均勻。第3、5天，與模型組比較，大、小劑量半夏酒糊組和田七跌打風(fēng)濕膏組右后肢周長(zhǎng)變化值均顯著減小（P<0.05，P<0.01），白酒組對(duì)大鼠造模后右后肢周長(zhǎng)變化沒有明顯的影響。

對(duì)大鼠外傷血瘀模型血液流變學(xué)的影響從表3可以看出，與空白組比較，模型組的血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)均顯著升高（P<0.01），說(shuō)明造模成功；與模型組比較，大劑量半夏酒糊組和田七跌打風(fēng)濕膏組可顯著降低血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)（P<0.01）；小劑量半夏酒糊組可顯著降低全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積、全血高切還原黏度、全血低切還原黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、全血低切相對(duì)黏度（P<0.01），可明顯降低紅細(xì)胞剛性指數(shù)、全血高切相對(duì)黏度（P<0.05）。白酒組對(duì)大鼠血液流變學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)沒有明顯的影響。

對(duì)大鼠外傷血瘀模型病理組織學(xué)的影響大鼠右后肢皮膚血瘀組織的病理組織學(xué)觀察結(jié)果：空白組動(dòng)物皮膚的角質(zhì)層、鱗狀細(xì)胞層、皮下組織中的毛囊、結(jié)締組織均正常；模型組動(dòng)物皮膚的角質(zhì)層、鱗狀細(xì)胞層變薄，皮下組織可見水腫和大量的血漿滲出，毛囊與結(jié)締組織散落呈片狀，可見少量的纖維增生；田七跌打風(fēng)濕膏組動(dòng)物的皮膚表皮的各層結(jié)構(gòu)和真皮層結(jié)構(gòu)中的毛、毛囊、汗腺、皮脂腺明顯的恢復(fù)；白酒組動(dòng)物皮膚的角質(zhì)層、鱗狀細(xì)胞層稍有增厚，皮下組織水腫和血漿的滲出明顯減少，毛囊與結(jié)締組織破碎；大劑量半夏酒糊組動(dòng)物皮膚的角質(zhì)層、鱗狀細(xì)胞層增厚、皮下組織中的水腫和血漿的滲出消失，有少量的炎細(xì)胞滲出；小劑量半夏酒糊組動(dòng)物皮膚的角質(zhì)層、鱗狀細(xì)胞層變薄和破損，皮下組織中的還有少量的水腫和血漿的滲出，毛囊、結(jié)締組織基本正常。經(jīng)Ridit檢驗(yàn)，與空白組比較，模型組出現(xiàn)顯著的病理組織損傷（P<0.01），說(shuō)明造模成功；與模型組比較，田七跌打風(fēng)濕膏組、大、小劑量半夏酒糊組均可顯著的改善動(dòng)物的病理組織損傷（P<0.01），白酒組減輕局部病變作用不明顯。

討論

血瘀證是指人體內(nèi)血行不暢、擁塞血脈或血溢脈外、停積為瘀的癥候。外傷血瘀是在外力作用下如杠桿擠壓或懸垂重物砸傷而成的血瘀證模型，原理來(lái)源于《黃帝內(nèi)經(jīng)》“若有所墮墜，惡疝，在內(nèi)而不去則氣血凝結(jié)”的論述[3]。肌肉豐富的部位受到外力的撞擊或擠壓，由于局部缺血會(huì)對(duì)機(jī)體引起局部及全身的雙重反應(yīng)，表現(xiàn)為固定疼痛、拒按、功能性障礙、病理性血腫及血液流變學(xué)的改變等，還影響了血瘀患者的運(yùn)動(dòng)[4-5]。

本實(shí)驗(yàn)采用定量化重物擊傷動(dòng)物單側(cè)后肢的方法造動(dòng)物外傷血瘀模型，以皮未破而內(nèi)損為度[6]。該方法常見，簡(jiǎn)便易行，成功率高。在地震和工傷事故中重物擊傷是一種常見的造成血瘀的原因，動(dòng)物模型是當(dāng)代醫(yī)學(xué)研究中的重要技術(shù)平臺(tái)，應(yīng)用這一造模方法對(duì)外傷血瘀證進(jìn)行研究具有現(xiàn)實(shí)的意義。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)模型大鼠右后肢損傷癥狀積分、右后肢同部位周長(zhǎng)差、血液流變學(xué)和病理變化[7]指標(biāo)對(duì)半夏酒糊療效進(jìn)行評(píng)價(jià)，大鼠右后肢損傷癥狀積分、右后肢同部位周長(zhǎng)差變化指標(biāo)可直觀反映出損傷部位病變程度，指標(biāo)觀測(cè)方法操作簡(jiǎn)單方便；血液流變學(xué)是血瘀狀況的重要觀察指標(biāo)，血液流變性、血流動(dòng)力學(xué)變化與血瘀形成具有相關(guān)性[8-9]；病理組織學(xué)變化可反映損傷組織皮膚炎細(xì)胞侵潤(rùn)程度和愈合情況。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大劑量半夏酒糊組可顯著降低大鼠第3、5天損傷癥狀積分、右后肢造模前后周長(zhǎng)變化，可顯著降低全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積、全血高切還原黏度、全血低切還原黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、全血低切相對(duì)黏度、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、全血高切相對(duì)黏度、紅細(xì)胞變形指數(shù)，顯著改善大鼠病理組織損傷；小劑量半夏酒糊組可明顯降低大鼠第3、5天損傷癥狀積分、顯著降低右后肢造模前后周長(zhǎng)差，小劑量半夏酒糊組可顯著降低全血黏度、血漿黏度、紅細(xì)胞壓積、全血高切還原黏度、全血低切還原黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、全血低切相對(duì)黏度，可明顯降低紅細(xì)胞剛性指數(shù)、全血高切相對(duì)黏度，可顯著改善大鼠病理組織損傷。提示半夏外用對(duì)外傷血瘀具有好的療效，且其療效以大劑量半夏酒糊組為優(yōu)。